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细胞培养中常见的生长问题!

  • 发布日期:2020-11-11      浏览次数:33
    • 确保充分的细胞生长是细胞培养和收集精-确数据的一个关键部分。对于单层生长的细胞,融合度定义为显微镜观察到被一层细胞覆盖的培养器皿表面积的百分比。比如,50%细胞融合是指一半的培养皿/瓶等的表面被细胞覆盖。对于悬浮细胞,通常用细胞系或类型的细胞密度衡量其生长过程,但或许也可通过浊度增加和培养基颜色稳定评估“融合“。

      培养中的细胞生长一般发生在四个阶段,如图所示,随着时间推移的细胞计数的对数形成一个S型曲线(S-型),不同细胞系和培养物在每个阶段需要的时间有很大差异。

      停滞期:细胞适应培养条件的阶段,细胞在此阶段不分裂。细胞通常在起始培养后的24小时内附着,该阶段的总时长取决于培养之初使用细胞的生长阶段和接种密度。

      对数期:细胞在此阶段积极分裂,是评估群体生长和通用数据收集的最-佳时间。对数期的后期,过度拥挤导致细胞胁迫之前是传代细胞(亚培养)的最-佳时机。

      平稳期:随着细胞达到100%融合,细胞在此阶段生长放缓,不足1/10的细胞处于活跃细胞周期。细胞在此阶段最容易受伤,因此需要小心观察以确保细胞在此阶段之前或之初进行传代。

      衰退期:细胞周期的自然组成部分。在此阶段,随着细胞死亡占据主导地位,活细胞群体数量减少。

      评估细胞生长

      准确的细胞计数对评估培养的细胞生长是至关重要,因为错误的计数会导致关于细胞健康的错误结论。细胞计数可以使用血球计数板、自动计数器进行。

      预防和消除细胞生长问题的常规技巧和技术

      除了遵循良好的无菌操作实践以防止微生物和化学污染外,细胞生长问题的早期诊断和处理的关键是对培养物的频繁观察和详细的记录保存。

      同样重要的是需要考虑解决问题最-有效的方式是详细和耗时的寻找细胞生长不佳的罪魁祸首,还是最-好简单地使用新的试剂、储存液和物资重新开始。

      仔细地观察

      为了解决细胞生长问题,必须首先意识到问题的存在。许多生长问题都是微妙的,所以定期、详细的观察实验中所有培养器皿是非常必要的。显微镜下的快速评估可能是不够的,许多特殊的生长模式在细胞固定和染色之前并不明显。另外,仍需定期检查培养基和其他试剂是否污染。

      精-确记录

      当试图诊断和解决细胞生长不良的问题时,拥有关于培养各个方面的好笔记可以节省时间、金钱和珍贵的修饰细胞如敲除细胞系。比如,标准化细胞密度、记录储存细胞的传代次数对判断储存液是否可能为问题来源至关重要。同样,在得出某批次培养基是罪魁祸首的结论之前,必须首先确保哪些培养皿使用了这一批次。

      需要记录的重要信息包括所有冻存管的来源、身-份证明、无污染、传代次数、细胞密度、冷冻和储存方法等。使用的所有试剂的成分和浓度、批号、首次打开和使用日期都应该记录下来。所有培养器皿的批号也应该记录。细胞培养个方面的详细实验步骤应该标准化和遵循,所有冻存管和培养器皿的精-确和详细标签都是至关重要的。注意小细节,比如培养箱清理和保养的时间、CO2罐更换的时间、培养室最后筛查支原体的时间,并记录任何异常的事件。

      知道何时止损

      有时,发现问题的确切来源不像解决它那么重要,因此,立即修复多个潜在的导致生长不良的原因比尝试隔离确切的问题更节约时间和成本。比如,使用新的储存细胞和所有新的培养基、血清、缓冲液等重新开始,比分别独立尝试各物料的新批次直到发现罪魁祸首更合乎情理。

       

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