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皂苷的鉴别实验

  • 发布日期:2020-11-25      浏览次数:102
    • 实验方法原理:皂苷别称碱皂体;皂素;皂甙;皂角苷;或皂草苷。皂苷是苷元为三萜或螺旋甾烷类化合物的一类糖苷,主要分布于陆地高等植物中,也少量存在于海星和海参等海洋生物中。 许多中草药如人参、远志、桔梗、甘草、知母和柴胡等的主要有效成分都含有皂苷。有些皂苷还具有抗菌的活性或解热、镇静、抗癌等有价值的生物活性。

      1.检品溶液的制备:

      1)取皂角碎块1g于大试管(或小烧杯)中,加蒸馏水15ml,于30~90°水浴上浸渍15分钟后过滤,滤液供鉴别用。

      2)取薯蓣碎块0.5g加上法同样制备得薯蓣水浸液。

      3)取薯蓣碎块0.5g于大试管或小锥形瓶中加95%乙醇10ml于水浴上温浸15分钟,滤液供鉴别。

      2.鉴别试验:

      (1)溶血试验:取滤纸片一小块,于小心处滴加皂角浸液一滴,待干后于同处再滴加一滴,如是反复操作至滴加数滴,干燥后无喷雾血球试液(取牛血、羊血或兔血一份,用玻棒或棉签搅和,除去凝集的血蛋白,加pH7.4磷酸盐缓冲液一份稀释即得),数分钟后观察在红色的背底中是否出现无红色的黄色(或透明)斑点(中心处皂解浸液原点)。(本反应亦可在试管中进行,血球试液中草药浸液中的皂苷溶解后,血球液由浑浊变为澄明。此外还可在载玻片上进行,并在显微镜下观察血球破裂溶解前后的状况)。

      (2)泡沫试验:薯蓣浸液,皂角浸液各2ml,分别置于试管中。用力振摇一分钟后放置,在10分钟内观察二管是否都有持久性泡沫产生?

      (3)醋酐浓硫酸试验(Liebermann-Burchard反应),皂角浸液5ml,于蒸发皿中在水浴上蒸干,加入1ml醋酐使其溶解,滴于干燥比色盘中,从边沿缓缓滴加浓硫酸1滴,观察颜色变化。另取薯蓣浸液5ml,置于蒸发皿中,在水浴上蒸干,加入1ml醋酐溶液,并倾入比色盘中,(试管)沿管壁加入几滴浓硫酸,观察界面间是否有紫红色环产生?

      (4)氯-仿-浓硫酸试验(Salkowski反应):取薯蓣醇浸液2ml,在水浴上蒸干,有氯-仿1ml溶解,转入干燥小试管中,沿壁小心加浓硫酸1ml,氯-仿层显红或兰色,硫酸层有绿色荧光,示含甾体皂苷。

      注意事项:
      采用比色法测定总皂苷含量时,标准品可以选择两种或两种以上进行结果对比,取二者的平均值作为最终测定结果,使结果更具有意义。测定回收率时,也可以选择两种或两种以上标准品进行对比检测。

      其他:
      试验的操作采用比色法,并选择酶标仪处理数据,操作简便快捷,线性关系良好,并减少了用紫外分光光度计法操作时的大量时间,降低了时间对显色结果的影响,稳定性、精密度、重复性及回收率均达到标准要求。

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