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牛血清储存、分装、解冻要点

  • 发布日期:2020-12-09      浏览次数:145
    • 细胞培养的一个重要环节是选择成分适合又营养丰富的细胞培养基。这其中以经典培养基添加5~10%的牛血清-为常用,它能维持细胞活力,促进细胞增殖。

      牛血清在细胞培养中提供细胞生长和增殖所需的生长因子、激素、蛋白、粘附和铺展因子和其他多种营养物质。

      下面列出牛血清储存、分装、解冻要点,以供初次接触细胞培养的新手或实验人员参考,以促进试剂的合理应用和细胞的顺利培养。

       

      一、储存

      要保证牛血清质量,牛血清必须贮于-20℃。不能长期存放于4℃和室温,否则影响血清品质。同时避免血清的反复冻融。

      二、分装

      如果1次无法用完1瓶血清,可将血清40~45mL分装于无菌的50mL离心管中,每次依用量取出。由于血清结冻时体积会增加约10% ,装管时必须预留此膨胀体积之空问,否则易发生血清挤出容器发生污染,或容器冻裂。

      三、解冻

      要解冻使用血清时,应使用逐步解冻法,才不会使血清质量受损。具体解冻方法见下表,该方法系缔一生物与专家总结而成,可大限度地保留因子活性,非常重要。

      不同容积血清(100ml,500ml,1L)使用不同的融化方案,全程只需要大约2.5个小时。

      需要严格按照三步法操作。如无法保证20℃水浴,也可用接近此温度的自来水。

      在融化过程中要慢慢摇动,使血清混匀,但不要产生泡沫!

      在解冻过程中必须注意的是,水浴时血清的平面要完全浸在水中。要一直规则均匀摇晃(小心勿造成气泡,不要产生泡沫,否则有损质量),使温度与成分始终均一。勿直接由-20℃放至37℃快速解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生大量沉淀。

      一般不需要对胎牛血清进行热灭活。因胎牛血清中补体系统尚不完全,影响极小。热灭活反而非常造成沉淀和导致部分因子失活。

      以上意见希望能对你的实验带来帮助。

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