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葡聚糖凝胶的使用方法讲解

  • 发布日期:2021-02-22      浏览次数:21
    •   今天小编给大家讲讲葡聚糖凝胶的使用方法:
       
        1.凝胶预溶胀:在凝胶使用前,首先将其溶胀,具体方法:室温下,将干粉浸泡在超纯水中充分溶胀24小时,并不断搅拌保证凝胶 充分溶胀;或者在室温下,将干粉浸泡在50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶完全溶胀,用超纯水洗去乙醇;
       
        2.装柱:将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性注入柱内,注意要避免柱内产生气泡或者断层,保持湿态装柱,可在凝胶可承受的操作压下装柱,保证装柱均匀,装完柱可以检测柱效,检查凝胶装填是否合格。
       
        3.平衡:上样前用平衡液平衡层析柱至少3-5个柱体积直到基线平稳;
       
        4.上样:凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积,初次上样建议控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱高控制在40-50cm以下,过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制,脱盐时高径比为5:1即可
       
        5.洗脱方法:可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化;
       
        6.在位清洗(CIP):凝胶使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
       
        7.保存:凝胶使用完后,可将其回收,可将凝胶用超纯水冲洗干净并滤干,加入0.02%的叠氮钠做为防腐剂,或者浸泡在20%的乙醇中,防止长菌。

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