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血清的筛选、购买、灭活和无菌分装

  • 发布日期:2021-03-11      浏览次数:143
    • 一、不同厂家胎牛血清的批号筛选

      1.动物细胞培养用血清的基本要求

      用于动物细胞培养的血清,应富含细胞活性物质,尤其有丰富细胞生长因子、维生素、氨基酸等成分,但不能有微生物污染,尤其不能有细胞型微生物。首-选的培养用血清是胎牛血清,其次可以经特定筛选后选择使用某些品牌的新生牛血清或小牛血清。在配液标识的书写上,一般用FCS表示胎牛血清,用BS表示牛血清。

      由于在血清超滤除菌时,没有细胞壁的原核微生物支原体可能容易通过0.22μm的细菌滤器,甚至通过0.lμm的细菌滤器。

      考虑到上述因素,使得不同厂家的血清,在细胞生长因子种类与浓度等方面存在不同,残留微生物的风险也不同,即便相同厂家的血清也可能存在批间差异。

      2.血清筛选方法

      普通的血清质量筛选方法是利用特定细胞株的克隆化培养进行。选择克隆形成率高的血清批号进行购买。

      可以比较出不同厂家的血清或相同厂家的不同批号的血清质量差异,购买时尽量选择细胞生长快、克隆形成时间短、无细胞畸形、无微生物污染特别是支原体污染的批号。

      3.进口血清的筛选原则

      尽量选择供货量大,使用用户广泛的、信誉良好的品牌产品,如Gibco品牌、ATCC品牌。批量购买前,应做克隆化细胞培养,判断该批号血清的质量水平。

      购买时,好直接向一级代理商订购。如果经手二级、三级代理商订购,很可能由于运输、保存等环节的增加而引入不可预知的风险。如反复冻融多次的血清,其中的细胞生长因子等细胞活性物质将明显缩减,不利于动物细胞培养。

      4.国产血清的筛选原则

      尽量选择供货量大,供货历史比较长,信誉良好,使用用户比较广泛的那些厂家进行血清购买前的筛选。

      批量购买前,务必核实可购买的批号和供货量,并及时做克隆化细胞培养,判断该批号血清的质量水平。

      购买时,尽量购买一个批号的血清。直接向一级代理商订购,如果经手二级、三级代理商订殉,很可能由于运输、保存等环节的增加,或经手人的细胞培养技术背景薄弱等因素,从而引入不可预知的风险,导致不必要的经济损失,影响实验进程和生产进度。如果不得不向二级、三级经销商购买,务必详细写明订单要求,注明必要的注意事项。

      二、血清的灭活

      关于未灭活血清与灭活血清的判识,可以通过仔细阅读所购血清的说明书,或直接联-系信誉好的供货商,便可以清楚是否已经灭活。

      已经灭活的血清在使用前无需灭活处理,否则,需要用户自行按血清灭活方法进行灭活处理方可用于动物细胞培养。

      血清灭活的主要理由是使血清中含有的补体灭活,以免用于动物细胞培养时发生补体攻击细胞膜,导致所培养的细胞坏死。灭活条件下,也能灭活血清中可能存在的支原体。

      三、灭活血清的无菌分装与保存

      灭活后的血清应及时按预计的每次使用量进行无菌分装,减少血清冻融的次数,以免血清中的细胞活性物质受破坏。分装后,加写标识,平衡到室温后转入-20℃冰箱存放。

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