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噬菌体试验的基本方法

  • 发布日期:2021-03-30      浏览次数:53
    •  (一)噬菌体的分离和纯化

       噬菌体的分离

         每份未处理的污水样品取100mL,混合后,经36±1℃培养14~24h,通过孔径为0.45mm的薄膜滤器,检查滤液中是否有噬菌体的存在。用斑点试验法检查噬菌体。

       单斑纯化

           根据斑点试验法的结果,估计滤液内噬菌体的数量。将滤液按百倍稀释法作两次连续稀释。即吸取0.02mL,稀释在2mL肉汤内,使成10-2;再吸取此稀释液0.02mL,稀释在2mL肉汤内,使成10-4。

      (二)PFU(pfu)和RTD

             PFU(pfu)和RTD是噬菌体效价的计量单位。PFU是噬斑形成单位,表示有感染能力的噬菌体数量,以每毫升内的PFU表示(PFU/ml)。RTD是常规试验稀释度,一般以平板上滴加噬菌体的部位刚刚能够出现或刚刚不能出现完全融合性裂解(CL)所需要的噬菌体稀释度。

      (三)噬菌体的制备

      繁殖菌  制备噬菌体用的宿主菌称为繁殖菌。噬菌体的繁殖菌应予以冻干保存。

      噬菌体种  制备用的噬菌体种应经三次纯化后保存。种子管先作PFU测定。

      (四)裂解谱和裂解模式

           裂解谱是指一种噬菌体的作用范围。裂解谱的测定是为了确定该噬菌体在种内或属内的广谱性,在种外或属外的交叉反应性。

            裂解模式是指几种噬菌体组成为配套,各种细菌培养物被几种噬菌体作用而出现的特殊的反应模式,不同的细菌,可呈现不同的反应模式。

          裂解谱和裂解模式应使用达到规定效价的噬菌体进行测定。肠杆菌科诊断用噬菌体一般用原液进行试验,效价要求在103~105RTD或109~1011PFU/ml之间。分型试验一般用1 RTD的噬菌体。

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