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细胞培养时产生细菌污染怎么办

  • 发布日期:2021-04-02      浏览次数:152
    • 细胞培养实验中,经常会遇到诸如外源污染、真菌污染、支原体污染、操作不当等各种问题,为解救细胞,需要针对不同问题对症下药,那么,细胞培养时产生细菌污染该如何解决呢?

      细菌是一种原核细胞微生物,其大小以微米(μm)计。常见的污染细菌有革兰氏阴性菌和大肠杆菌、假单胞菌等,革兰氏阴性菌中白色葡萄球菌等比较常见。

      一旦发生细菌污染较易发现,多数情况下培养液短期内颜色变黄,表明有大量酸性物质产生,出现明显混浊现象;有时静置的培养液液体初看不混浊,但稍加振荡,就有很多混浊物漂起。倒置显微镜下观察,可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮。必要时可取少量培养液涂片染色检查以证实细菌种类;有的培养液改变不明显而又疑有污染,可取出少量培养液用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种,也可取10ml细胞悬液以100rpm离心5min,沉淀中加入无抗生素的培养液2ml,置于37℃培养,24h可得结果。

      污染后细胞发生病理改变,胞内颗粒增多、增粗,最后变圆脱落死亡,造成试验失败和细胞株(系)丢失。一旦发现细胞被细菌污染,需要采取如下解决方案:

      (1) 丢弃所有已经污染的细胞和培养基;

      (2) 培养环境用新洁尔灭擦拭且UV灭菌24小时;

      (3) 培养试剂中加入P/S双抗。

      此外,在细胞培养时应尽可能使用一次性耗材及成品培养基,以减少细菌污染的可能性。

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