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蛋白质组学鉴定技术流程

  • 发布日期:2021-04-15      浏览次数:23
    • 蛋白质组(Proteome)的概念,蕞早由澳大利亚Macquarie大学的Wilkins和Williams于1994年首先提出的,是指一个基因组(Genome),或一个细胞、组织表达的所有蛋白质。
      蛋白质组学(Proteomics)以细胞、组织或生物体全体蛋白质为研究对象,通过高通量的色谱质谱联用技术检测样品所有蛋白质及其变化规律,包括蛋白质的表达水平,翻译后的修饰,蛋白与蛋白相互作用等,利用生物信息技术从整体的角度获得蛋白质水平上的关于疾病发生,细胞代谢等过程的变化,阐明生-理或病理条件下的变化机制。

      蛋白质全谱和混合蛋白鉴定分析指的是对完整的组织、体液或其提取物混合蛋白的组分进行分析,目的在于鉴定出尽可能多的肽段和蛋白质分子。针对单一蛋白的鉴定,如考染及银染的纯化蛋白(不含戊2醛,戊2醛会与蛋白质发生不可逆交联,严重影响质谱结果),对胶点或目的条带进行鉴定。针对混合蛋白样本,可以收集其蛋白溶液及泳道等,利用高效液相色谱-质谱联用( HPLC-MS/MS )技术,完成对样本的定性分析。


      蛋白质组学鉴定流程
      (1)样本中蛋白质的提取与质控(是否能染色;条带清晰;目的条带准确);
      (2)蛋白样品酶解成肽段;
      (3)肽段进入液相质谱联用仪,先在液相中预分离;再进入质谱;
      (4)经过质谱质量分析器检测器得到谱图;
      (5)谱图信息经过数据库比对,得到肽段和蛋白的信息;
      (6)生成样品鉴定结果。

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