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细胞培养的成败关键——无菌操作

  • 发布日期:2021-04-19      浏览次数:58
    • 无菌操作是决定细胞培养成败的关键因素,即便使用设备完善的实验室,若实验者粗心大意,操作不规范,也会导致污染。因此,所有操作都要最大可能的保证无菌,每一项工作都必须做到有条不紊和完全可靠。

      1、实验进行前:在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。根据实验要求,准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内,然后开始消毒。这可以避免开始实验后,因物品不全往返拿取而增加污染机会。

      2、无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。实验用品以70% ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。细胞培养实验操作应在抬面之中央无菌区域,勿在边缘之非无菌区域操作。

      3、 小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45°角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。

      4、工作人员应注意自身之安全,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作,并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程中,应避免引起aerosol 之产生,小心毒性药品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖锐针头之伤害等。

      5、定期检测下列项目

      (1)CO2 钢瓶的CO2 压力;(2) CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水,每周更换); CO2 培养箱定期消毒;(3) 无菌操作台内气流压力是否正常,定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜,预滤网(300 小时/预滤网,3000 小时/HEPA)。

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