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荧光定量PCR(qPCR)使用方法

  • 发布日期:2021-04-25      浏览次数:44
    • 荧光定量PCR法(qPCR):是在常规PCR基础上,将『针对支原体特异性保守序列的探针』做荧光标记,使PCR扩增后的产物带有荧光,利用荧光信号的变化和配套软件,进行DNA扩增反应的实时监测,简称qPCR。


      (经典法)
      1) 符合欧洲药典、中国药典要求,更适合细胞治疗,CAR-T,抗体药、疫苗等临床项目申报和质检。
      2)样本需先做DNA抽提。抽提后样本加入量为10μl。
      3) 厂家可协助完善方法验证步骤。


      支原体荧光定量PCR(qPCR)检测试剂盒(一步法)
      1)适合科研单位检测,或单位内检,用荧光定量PCR(qPCR)法检测细胞或其他生物基质。
      2) 比药典操作标准合并了一步,(将内控对照试剂预先混合在PCR mix试剂中),操作更简洁。
      3)样本量为2μl,灵敏度为50个基因组拷贝/反应。结果准确。

      优点:
      ①灵敏度高、特异性强。
      ②时间短,2-3小时出结果。
      ③检测结果可定量。
      ④操作简便。

      缺点:
      ①对于已做支原体灭活处理的样品,由于支原体DNA仍旧存在其中,PCR结果会出现假阳性。(可用培养法做补充验证)
      ②不同厂家生产的试剂盒质量差异巨大(由于引物及内在设计不同),需谨慎选择,尽量在专业人员推荐指导下使用。

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