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ELISA试剂盒实验边缘效应是什么原因?

  • 发布日期:2021-05-07      浏览次数:26
    •   咱们在运用ELISA试剂盒96孔板的试验测定的时分,常发现有“边缘效应",也就是外周孔显色较基地孔深。经研究证真实温育中的热力学梯度也许是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在试验室的常规ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃摆布)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与基地孔之间也许存在一热力学梯度。因而运用水浴或在将反响溶液参加至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很容易地扫除“边缘效应",而且可进步测定的重复性。
       
        ELISA试剂盒还有就是在试验中,必定有运用微量加样器参加样本的步骤。提示留意:加样不行太快,要防止加在孔壁上部,不行溅出和发生气泡。ELISA试剂盒太快的话无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区,易致使非特异吸附。溅出会对附近孔发生污染。出现气泡则反响液界面有区别。所以,有时分一份标本用一样的试剂盒这次测定为阳性,下次测定为阴性,通常就是上述加样及试剂的过错所造成的。
       
        操作步骤:
       
        1.取出试剂盒,于室温(20-25℃)放置15-30分钟。实验过程应在室温(20-25℃)内进行。
       
        2.取出酶标板,按照标准品的次序分别加入50μl的标准品溶液于空白微孔中。
       
        3.空白微孔中加入50μl的样品,空白对照加入50μl的蒸馏水;
       
        4.在样品孔中加入10μl的生物素;(不含空白对照孔,切忌:生物素只加样品孔!)
       
        5.在各孔中加入100μl的酶标记溶液;(不含空白对照孔)
       
        6.将酶标板用封口胶密封后,37℃孵育反应 1小时;(在孵育箱中保持稳定的温度与湿度)
       
        7.充分清洗酶标板3-5次,保持各孔有充足的水压;(浓缩洗涤液以1:100的比例与蒸馏水稀释)
       
        8.酶标板洗涤后用吸水纸彻底拍干;
       
        9.各孔加入显色剂A、B液各50μl;(不含空白对照孔)
       
        10.20-25℃下避光反应15分钟;
       
        11.各孔加入50μl终止液,终止反应;

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