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防止RNA酶污染的方法有哪些?

  • 发布日期:2021-05-31      浏览次数:31
    • 防止RNA酶污染的措施

      1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。

      2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯-仿冲洗(注意:有机玻璃器具因可被氯-仿腐蚀,故不能使用)。

      3. 有机玻璃的电泳槽等,可先用去污剂洗涤,双蒸水冲洗,乙醇干燥,再浸泡在3% H2O2 室温10min,然后用0.1% DEPC水冲洗,晾干。

      4. 配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC,在37℃处理12hr以上。然后用高压灭菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂,应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制,然后经0.22μm滤膜过滤除菌。

      5. 操作人员戴一次性kou罩、帽子、手套,实验过程中手套要勤换。

      6. 设置RNA操作专用实验室,所有器械等应为专用。

      常用的RNA酶抑制剂

      1. 焦磷酸二乙酯(DEPC):是一种强烈但不彻-底的RNA酶抑制剂。它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性,从而抑制酶的活性。

      2. 异硫氰酸胍:目前被认为是zui有-效的RNA酶抑制剂,它在裂解组织的同时也使RNA酶失活。它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来,又对RNA酶有强烈的变性作用。

      3. 氧钒核糖核苷复合物:由氧化钒离子和核苷形成的复合物,它和RNA酶结合形成过渡态类物质,几乎能完-全抑制RNA酶的活性。

      4. RNA酶的蛋白抑制剂(RNasin):从大鼠肝或人胎盘中提取得来的酸性糖蛋白。RNasin是RNA酶的一种非竞争性抑制剂,可以和多种RNA酶结合,使其失活。

      5. 其它:SDS、尿素、硅藻土等对RNA酶也有一定抑制作用

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