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pH对酶促反应速度的影响

  • 发布日期:2021-06-11      浏览次数:71
    • 【目的和要求】
      1. 了解pH对酶促反应速度的影响。
      2. 学习测定酶的最适pH的方法。
      【实验原理】
      酶促反应受环境pH的影响极为显著。 通常各种酶只有在一定的pH范围内才表现它的活力,一种酶表现其活性最高时的pH值,称为该酶的最适pH。低于或高于酶的最适pH时,酶的活性逐渐降低。不同酶的蕞适pH值不同。本实验仍以乳酸脱氢酶催化的反应为例,学习测定酶的最适pH的方法。


      【实验试剂和器材】
      (一)试剂:
      1. 不同pH值的缓冲液:
      100ml 0.33M柠檬酸,100ml 0.33M磷酸,3.54g 硼-酸,343ml 1M NaOH, 加水直到1升。用HCl滴定成pH值3.0、3.5、4.0、4.5直到12的不同pH值缓冲液。
      2. 0.01M NADH
      3. 0.1M 丙酮酸钠
      4. LDH


      【实验试剂和器材】
      (一)试剂:0.1M磷酸钾缓冲液(pH 7.0);0.01M NADH; 10M 丙酮酸钠;LDH
      (二)器材:紫外分光光度计 ,移液枪,吸头,1.5ml小离心管,离心管架


      【实验方法】
      (一)酶活性的测定:方法同实验7中的步骤1。
      (二)pH对酶促反应速度的影响:
      1. 在1.5 ml小离心管中分别加入:(总体积为1ml反应液)
      2. 混匀以上试剂,倒入比色皿中,然后将比色皿放入分光光度计后读取340nm处OD值,加入0.02ml LDH使用液,迅速搅匀,使反应开始,测定反应1分钟OD值的变化。
      3. 根据所测得的OD值的变化,计算出反应初速度。

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