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血球计数板细胞计数法

  • 发布日期:2020-11-23      浏览次数:97
    • 细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板(血球计数板)进行。即可用于分离(散)细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何,均须制备分散的细胞悬液。

      一、步骤

      1、制备细胞悬液:对于悬液培养的细胞,可直接进行下面的步骤2(计数与计算过程)。如果计数对象为贴壁生长的细胞,首先需将培养物按如下步骤制备成细胞悬液。

      1)、终止培养,将培养液吸出,用PBS洗培养物一次。

      2)、给培养瓶内加入1ml 0.25%胰蛋白酶溶液,于37℃消化3~5min 。期间不断在镜下观察。当细胞变圆接近脱壁时,弃消化液。

      3)、加入一定量的培养液(如果这些培养细胞不再有用,可加PBS),用吸管吹打,使细胞脱壁而制成细胞悬液。

      2、计数与计算过程

      1)、在细胞计数板中央放置计数的盖玻片。

      2)、用玻璃虹吸管吸取细胞,让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液,至盖玻片被液体充满为止。

      3)、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者,对于细胞团按单个细胞计数。

      4)、按下式计数细胞悬液的密度:细胞密度=(4个大格细胞总数/4)×104个/ml 。

      二、注意事项:

      1)、务必使分散成单个细胞,取样计数前,充分混匀细胞悬液。

      2)、显微镜下计数时,遇到2个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。如果细胞团>10%,说明细胞分散不充分。

      三、显微镜下血球计数板如下图:

       

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