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困难样本RNA提取的技能你get到了吗?

  • 发布日期:2020-11-27      浏览次数:180
    • DNA、RNA和蛋白质是三种重要的生物大分子,是生命现象的分子基础。DNA的遗传信息决定生命的主要性状,而mRNA在信息传递中起着重要的作用。其他两大类RNA,即rRNA和tRNA同样在蛋白质的生物合成中发挥着不可替代的功能。因此RNA在DNA和蛋白质中间起着中介的作用,其重要性不言而喻。

      在研究RNA的分子实验中,获得高质量的RNA至关重要,但是有些样本因为细胞结构特殊、代谢产物极其丰富、本身RNA丰度低等因素,影响到RNA提取质量。另外,由于RNA酶的广泛存在并难以消减的顽强特性,使得RNA的抽提纯化更为困难。

      那么今天我们针对RNA提取相关知识展开简短的介绍~

      一、 RNA提取原则

      (1) 保证RNA分子的完整性

      (2) 排除DNA分子的污染

      (3) 排除有机溶剂、金属离子、蛋白质、多糖、多酚、脂类的污染

      (4) 获得足量的核酸

      (5)方法操作简便,稳定性强



       不同组织中RNA丰度示意图

      二、 RNA种类

      有mRNA、rRNA、tRNA、LncRNA、circRNA、miRNA、piRNA、siRNA等

      三、 RNA提取注意事项

      1、操作环境干净无灰尘,严格戴好口-罩、手套等。

      2、实验所涉及的离心管、枪头、移液器、电泳槽、实验台面等要用RNase抑制剂彻底处理。

      3、实验所涉及的试剂、溶液,尤其是水必须确保RNase-Free。

      4、选择合适的匀浆方法。

      5、选择合适的裂解液。

      6、控制好样品的起始量。

      7、控制好裂解液与样品量的比例。

      8、RNA抽提成功的唯1经济标准是后续实验的一次成功,而不是得率。即综合RNA的得率和纯度。

      四、 RNA提取原理及常用方法问题

      1、 RNA提取原理

      RNA提取步骤,大致可分为裂解和纯化。首先对样品裂解,采用机械力、化学试剂等方法将RNA释放出来,随后去除蛋白质、糖、酚、金属离子等杂质,再用无水乙醇、异丙醇沉淀或载体吸附RNA,之后洗涤溶解即可得到核酸。

      2、RNA提取常用方法

          异硫氰酸胍/苯酚法(如Trizol法)

          试剂盒过柱法

          磁珠法

          改良方法

      3、RNA提取过程中常见问题




       

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