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细胞转染率低 转染试剂要全背锅吗?

  • 发布日期:2021-04-16      浏览次数:11
    • 目前细胞转染技术主要分为三大类:化学法、物理法及生物学法。但是没有一种方法是通用并且准确无误的,所以只有依据自己的实验要求或者实验探索选择理想的方法,才能获得漂亮的实验结果。当然也可以在前辈们发的文献中多看看,前车之鉴可以减少很多不必要的花费。

       

      细胞转染低都是PCR试剂的问题吗?PCR纯度不够确实会有这样的问题,所以选择PCR试剂很重要 主要还是以下几点影响:

      1. 其他微生物污染

      您觉得您养的细胞 ,不,不,不 ,可能您只知道您养的是细胞,你不知道的是您的细胞可能背着您养了一群小三,比如支原体,病毒,黑胶虫等等,特别是支原体它可以更改细胞的特性,穿透细胞膜进行基因改造,培养几代可能看不到“它”给细胞做的整容效果,但是随着代次的增多,细胞就慢慢体现出来了,“它”已经变得不是从前的那个“它”了,所以建议在转染之前进行一次支原体检测,如有支原体清除干净再转染。

      2.交叉污染:

      如果同时养了很多细胞,在操作的时候没有规范化,然后不小心让A细胞到B细胞家里走了个亲戚,蕞后的结果可能就是A细胞和B细胞不离不弃,若B细胞比较强悍,可能会发生鸠占鹊巢的事情。所以操作的时候一定要注意,发生不明确的交叉污染,宁可错杀一千,不要放过一个。

      3.转染高不高,时机很重要

      转染细胞真的没有那么容易 ,想什么时候都可以,就像不尿急,占个厕所也拉不出来,相比非分裂的细胞—正在分裂的细胞往往会比静止细胞更容易摄取并表达外源DNA,因此对大多数操作而言,细胞一般建议在转染当天或者前一天种板,需要注意的是,铺板细胞不宜过多,特别是疯长的癌细胞,因为如果细胞较多,甚至互相叠加,细胞自己都吃不饱,住不好,它也糟心的很,哪有时间和您玩转染?

      4. 抗生素和血清带偏的转染效果

      本来想 ,能让个细胞好好生长不容易 ,为了防治心里觉得细胞可能产生的各种污染 ,于是给他们加上各种抗生素预防,比如青霉素和链霉素,在细胞转染的时候,若含有这两个组分,可增加细胞的通透性,导致转染过低或者细胞全死亡,所以细胞它是不会说话 ,要是会说话,肯定要骂我们了 ,好好的一直给他们吃各种的药。有些转染技术如脂质体转染在有血清存在的情况下效率会很低,因此转染前要去除血清。Cell systems原代细胞采用无抗体洗涤离心分选,可以让细胞实验更为精-确,使用他们的细胞发表的文献影响因子在10分以上。

      5. 另外DNA不纯,携亲戚上阵或内毒素超标,都会引起转染效果偏低或者细胞死亡现象的发生,选择试剂很重要

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