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RNA提取小技巧,必看~!

  • 发布日期:2021-06-08      浏览次数:38
    • 今天给大家带来《qRT-PCR》之---如何提取细胞RNA!

      一、基本原则
      避免RNA酶污染,全程戴kou罩和无菌乳胶手套(汗液和唾液中含有大量RNA酶)

      二、主要试剂及仪器
      Trizol、氯仿(3lv甲烷)、异丙醇、无水乙醇、DEPC水(或ddH2O)

      三、操作步骤(全程戴kou罩和手套)
      1、Trizol处理。将细胞培养基吸出后,用预冷PBS洗涤3次,加入1ml Trizol(100mm培养皿),室温裂解1-2min,用移液枪均匀吹下细胞并置于无菌1.5ml EP管,上下轻柔颠倒数次,室温静置5min。
      2、加入1/5体积氯仿,颠倒混匀10次,室温静置5min,4度,12000rmp,离心20min。(离心机提前预冷至4度)
      3、将水相转移至新EP 管(缓吸、宁缺毋滥),加入等体积异丙醇,颠倒混匀10次,室温静置10min,4度,12000rmp,离心15min。
      4、用真空泵或移液枪小心吸取上清液,加入预冷75%乙醇(无水乙醇配置), 4度,12000rmp,离心10min。
      5、弃上清液,EP管倒扣,空气干燥5~10min。
      6、10~100ul DEPC水 (或ddH2O)溶解。
      7、NanoDrop 2000超微量分光光度计定量,读取OD260/OD280比值。若比值在1.8~2.0之间,可进行下一步逆转录反应,若低于1.8,可能存在蛋白污染。
      8、若暂时不逆转录,RNA置于-80度冰箱保存。

       

       

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