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Trizol(总RNA提取试剂)

Trizol(总RNA提取试剂)

更新时间:2020-09-22

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产品特点:Trizol(总RNA提取试剂),本产品具有以下特点:①适用范围广;②操作简单,整个过程1小时内完成;③纯度高;④污染少。

详细资料

【简介说明】
Trizol是一种新型的用于细胞或组织的总RNA提取试剂,Trizol采用与Invitrogen TRIzol相似的原理和方法,其颜色、抽提的方法和步骤与后者完全相同。 Trizol含酚和异硫酸胍等物质,能迅速裂解细胞或组织并且灭活核酸酶,保持RNA的完整性。加入并离心后,溶液形成上清层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色)。上清层用沉淀回收总RNA,中间层用乙醇沉淀回收DNA,下层用沉淀回收蛋白。

Trizol适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA,既可用于小量样品(50~100 mg组织、5×106细胞),也可用于大量样品(>1g组织/>107细胞)。提取的总RNA质量高,可用于Northern blot、Dot blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。本产品具有以下特点:①适用范围广;②操作简单,整个过程1小时内完成;③纯度高;④污染少。

 


操作步骤(仅供参考):
样品准备
⑴贴壁细胞:
①直接裂解:直接在培养瓶/皿中加入Trizol裂解细胞,每10cm2面积加1ml Trizol,用移液器吹打混匀。
②胰蛋白酶消化:用无菌PBS洗涤细胞后,加入含有0.05~0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞,当细胞脱离容器壁后,加入含有血清的培养基终止反应,将细胞溶液转移至无RNase的离心管中,5000~6000g离心5 min,收集细胞沉淀,去除上清。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净,否则裂解不完全,降低RNA收获率。  
⑵悬浮细胞:无需清洗细胞,直接5000~6000 g离心5 min,收集细胞。每5×106~107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1ml Trizol。
⑶组织:取新鲜动物或者植物组织或者-70℃冻存组织,50~100mg组织在液氮中充分研磨或者加入1ml Trizol研磨或者用匀浆器匀浆处理。样品体积一般不超过Trizol体积的10%。研磨要迅速,以1min为佳。
⑷血液:取0.5~1 ml新鲜或冻存的血液,12000g离心5 min,去除血浆,加入1ml Trizol,充分振荡混匀。
核酸分离:充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存5~10 min后,充分振荡,反复1~3次),将裂解样品或匀浆液室温放置5~10 min,使核蛋白与核酸完全分离。
样品分层:加入0.2 ml/1ml Trizol,剧烈振荡15 s,室温放置2~3 min。置于4℃离心机,12000 g离心10~15 min。上层为水相,中间层和下层为有机相,RNA在上层水相。
沉淀RNA:吸取上层水相(约500μl)转移至无RNase的离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体DNA污染),加入等体积混匀(或者加入1.2倍体积Leagene Trizol专用RNA沉淀液,超低温冰箱放置2~3hr,可以大大提高RNA回收率),室温放置15~20 min。12000 g 4℃离心10 min,离心后管侧或管底形成胶状沉淀,弃上清。
洗涤RNA:加入1ml DEPC水配制的75%乙醇/1ml Trizol洗涤沉淀(或者加入1ml Leagene Trizol专用RNA洗涤液,可以大大提高RNA纯度),室温放置5~10 min,7500g 4℃离心5 min,弃上清。室温干燥5~10 min,不宜过分干燥,否则RNA难以溶解。
溶解RNA:加入30~50ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA,-70℃长期保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织中RNase含量高的样品,沉淀时用100%去离子甲酰胺溶解。


分析与定量:
测定样品在260 nm和280 nm的吸收值确定RNA的质量。按1OD=40pg RNA计算RNA的产率。OD260/280在1.8~2.0视为抽提RNA纯度较好。浓度在4μg/ml以上的样品适于用分光光度计测定。
进行甲醛变性琼脂糖电泳,确定RNA的完整性和污染情况。
核酸分析仪测定RNA的质量和纯度。


注意事项:
1、 样品保存:加入Trizol混匀后,样品可在-70℃放置1~2月;RNA样品可以在70%酒精中-70℃保存2~4周:如果需要长期保存,应置于超低温冰箱中保存。
2、 Trizol是强腐蚀性物质,污染皮肤或眼睛后,立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
3、 Trizol可常温运输,建议保存4℃保存。
4、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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