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羧基化4FF琼脂糖凝胶

羧基化4FF琼脂糖凝胶

更新时间:2020-09-28

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厂商性质:经销商

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产品特点:羧基化4FF琼脂糖凝胶,保质期:在-20℃或以下可保存1年或以上,使用过程中可短时间保存于4℃,请勿反复冻融或于0℃以上久置。

详细资料

产品名称:羧基化4FF琼脂糖凝胶
供应商:昆山远慕
产品规格:50ml
保质期:在-20℃或以下可保存1年或以上,使用过程中可短时间保存于4℃,请勿反复冻融或于0℃以上久置。

 

外观:本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

羧基化4FF琼脂糖凝胶应用:本产品具有很高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点,非特异性吸附低,回收率高,可用有机溶剂及1~2mol/L 的NaOH在位清洗,适用于工业规模生产,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶色谱纯化。

装柱
凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高,为了保证分离效果,一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶,或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子,可在柱床稳定后将柱床压紧,接好管路。
(1)让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。
(2)选择一根一定直径的柱子,长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶(约为柱床体积的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。
(3)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。
(4)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
(5)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定。用缓冲液平衡柱子,到柱床稳定。
(6)最-好用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平,上好柱头。
5.2 平衡
让缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变。
5.3 上样
(1)样品用缓冲液配制,浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理,再上样。
(2)介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的,分子量大的先流出来。
(3)上样体积约为柱体积的1~2%,越小分离越好。
5.4 洗脱
用缓冲液洗脱,洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
5.5 再生
一般用缓冲液洗到平衡,可再次使用。
5.6 注意
在装柱、使用和保存柱子的时候,始终要避免柱子流干气泡进入。若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
5.7 在位清洗
(1)对于以离子键结合上去的蛋白,可以用2M NaCl去除。
(2)对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类,可用1M NaOH 去除。
(3)对强疏水性结合的蛋白、脂类等,用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗,但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加,否则容易产生气泡。
清洗完毕后,用至少3倍缓冲液平衡柱子。
5.8 注意
在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干气泡进入。
5.9 去热源
用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除:
(1)2倍柱体积的70%乙醇;
(2)2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5;
(3)1倍柱体积4M尿素;
(4)3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M Nacl;
以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。
5.10 消毒
用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积,初始缓冲液平衡柱子。
注意:上样之前,样品必须去除色素,否则色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。

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